ELISA實(shí)驗(yàn)：酶聯(lián)免疫試劑盒吸附測(cè)定原理

　　酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)的原理是：利用抗原抗體的特異性結(jié)合+酶催化底物顯色，實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)待測(cè)物的定性或定量檢測(cè)?，具體機(jī)制結(jié)合試劑盒結(jié)構(gòu)拆分說(shuō)明如下：

　　原理基礎(chǔ)

　　ELISA試劑盒基于?固相吸附?和?酶促反應(yīng)?兩個(gè)技術(shù)：

　　固相吸附?：將抗原或抗體預(yù)先固定在聚苯乙烯微孔板孔壁上，固相載體可以持續(xù)吸附蛋白質(zhì)，同時(shí)保留其免疫活性。

　　特異性結(jié)合?：利用抗原和抗體可以發(fā)生特異性結(jié)合的特性，讓帶有酶標(biāo)記的抗體(或抗原)與固定在固相上的對(duì)應(yīng)抗原(或抗體)結(jié)合。

　　顯色放大檢測(cè)?：結(jié)合在固相上的酶可以催化底物發(fā)生顯色反應(yīng)，酶催化反應(yīng)會(huì)逐級(jí)放大信號(hào)，顯色的深淺和目標(biāo)待測(cè)物的含量直接相關(guān)，通過(guò)酶標(biāo)儀讀取吸光度即可計(jì)算待測(cè)物濃度。

　　試劑盒檢測(cè)的通用流程

　　包被?：將特異性抗體吸附到微孔板孔壁，洗滌去除未結(jié)合的抗體。

　　封閉?：加入封閉液封閉孔壁上未被吸附的空白位點(diǎn)，減少后續(xù)非特異性結(jié)合帶來(lái)的背景干擾，再次洗滌。

　　加樣結(jié)合?：加入待測(cè)樣本，樣本中的抗原會(huì)和固相抗體特異性結(jié)合，形成固相抗原-抗體復(fù)合物，洗滌去除未結(jié)合的雜質(zhì)。本生BUNSEN Elisa試劑盒

　　加酶標(biāo)抗體?：加入酶標(biāo)記的特異性抗體，會(huì)和結(jié)合在固相上的抗原結(jié)合，形成「固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體」復(fù)合物，洗滌去除游離酶標(biāo)抗體。

　　顯色檢測(cè)?：加入酶對(duì)應(yīng)的底物，酶催化底物水解/氧化產(chǎn)生有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與樣本中待測(cè)抗原的量成正比，最后通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度(OD值)，就能計(jì)算出待測(cè)物的濃度。

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